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液相色谱仪常见问题及处理方法

   发布于:2020-10-02 18:07

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  液相色谱仪常见问题及处理方法_化学_自然科学_专业资料。精选资料 液相色谱常见问题及处理方法 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 1、样品量不足,解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配

  精选资料 液相色谱常见问题及处理方法 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 1、样品量不足,解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4、检测器衰减太多。调整衰减即可。 5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7、检测池中有气泡。解决办法为排气。 8、流动相流量不合适。调整流速即可。 为什么HPLC柱柱压过高 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱 子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 1、拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检 查(在安装了保护预柱的情况下); 2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,若压力仍高则是管路堵塞,需清 洗,若压力下降,再检查; 3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此 时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下降,再检 查; 4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是 这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱 子 如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化 漂移现象 可修改编辑 精选资料 1、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定 2、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡 快速变化现象 1. 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定 2、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 HPLC 仪器问题 1、 我的HPLC泵压明显的偏高,请问可能的原因? 答:流速设定过高;流动相或进样中有机械杂质,造成保护柱、柱前筛板或在 线过滤器阻塞;流动相粘度过大;柱温过低;缓冲盐结晶;压力传感器故障。 2、 基线不稳,上下波动或漂移的原因是什么,如何解决? 答:a.流动相有溶解气体;用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气 b.单向阀堵塞;取下单向阀,用超声波在纯水中超20分钟左右,去处堵塞物 c.泵密封损坏,造成压力波动;更换泵密封 d.系统存在漏液点;确定漏液位置并维修 f.柱后产生气泡;流通池出液口加负压调整器 g.检测器没有设定在最大吸收波长处;将波长调整至最大吸收波长处 h.柱平衡慢,特别是流动相发生变化时;用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流 动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 3、 接头处为何经常漏液,如何处理? 答:接头没有拧紧;拧松后再紧,手紧接头以手劲为限,不要使用工具,不锈 钢接头先用手拧紧,再用专用扳手紧1/4-1/2圈,注意接头中的管路一定要通到底, 否则会留下死体积。接头被污染或磨损;建议更换接头。接头不匹配,建议使用同 一品牌的配件。 4、 进样阀漏液是如何造成的? 答:a.转子密封损坏;更换转子密封 b.定量环阻塞;清洗或更换定量环 c.进样口密封松动;调整松紧度 可修改编辑 精选资料 d.进样针头尺寸不合适,一般是过短;使用恰当的进样针(注意针头形状) e.废液管中产生虹吸;清空废液管 谱图问题 1、 问:造成峰拖尾的原因是什么,如何消除? 答:a.筛板阻塞;反冲色谱柱、更换进口筛板 b.色谱柱塌陷;填充色谱柱 c.有干扰物质的存在;使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱 e.流动相PH值不合适;调整PH值,对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对 称峰 f.样品与填料表面的溶化点发生反应;加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更 改色谱柱 2、 问:造成峰分叉的原因是什么,如何消除? 答:保护柱或分析柱污染;取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如 果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染, 运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱 柱。样品溶剂不溶于流动相;改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。 3、 问:K值增加时,拖尾更严重,这是为什么? 答:反相模式,二级保留效应; a.加入三乙胺(或碱性样品) b.加入乙酸(或酸性样品) c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品) d.更换一支柱子 4、 问:保留时间的波动有几种可能的原因? 答:温控不当;调节好柱温。流动相组分变化;防止流动相蒸发、反应等,做 梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡;在每一次运行之前给予足 够的时间平衡色谱柱。 液相色谱常用符号与术语表 ACN 乙腈 Acetonitrile AUFS 满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale 可修改编辑 精选资料 As 峰不对称因子 B 二元流动相中的强溶剂;例如:反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇 BSA 牛血清白蛋白(一种蛋白质) Bovine serum albumin CAF 咖啡因(中性溶质) Caffeine CRF 色谱响应因子 Chromatographic response function;色谱图总分离度的 定量指标 dc 色谱柱内径(cm) DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine DNB 2,4-二硝基甲酰(基) 2,4-Dinitrobenzoyl dp 色谱柱填料的粒度(cm) DRYLAB 液相资源公司(LC Resources INC.)的计算机模拟软件。DRYLAB I 用于等度预测,DRYLAB G用于梯度预测 F 流动相的流速(ml/min) FC-113 1,1,2-三氟-1,2,

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